生物安全实验室洁净等级规划区分标准

  本文阐述了洁净室（区）的检测。对洁净室（区）级别参数尘粒最大允许数、微生物最大允数、换气次数、照度、压差、温度和相对湿度进行了实际检验测试方面的归纳和总结。

  兽药GMP是指兽药生产质量管理规范，是兽药生产、质量管理的制度和基本准则。兽药GMP对于洁净室（区）的空调净化系统等硬件要求很严格，洁净级别划分的规定亦十分明确。洁净室（区）的洁净级别主要用尘粒最大允许数、微生物最大允许数和换气次数3个参数来划分，同时对照度、压差、温度和相对湿度等参数也作出了具体的指导和规定。这些参数能对洁净室（区）的级别作出相应合理的、科学的验证和监测。

  尘粒是指一般尺寸为0.001μm～1000μm的固态和液态物质或两者的混合物。尘粒检验测试主要采用仪器光散射法，即空气中的悬浮粒子在光的照射下产生光散射现象，散射光的强度与粒子的表面积成正比。检测时，先确认空调净化系统是否处于正常运作时的状态，换气次数或风速、压差能否达到一定的要求。然后按人流和物流的规定进入洁净室（区）进行动态或静态检测，并测量洁净室（区）的面积和容积，确定采样点的数目、位置和采样量。检测要点见表1。

  尘粒采样时还需注意：1.在确认仪器计数稳定后方可开始连续读数。2.采样管必须干净，严禁渗漏。3.采样管的长度应根据仪器的允许长度。除另有规定外，长度小于1.5m。4.计数器采样口和仪器工作位置应处在同一气压和温度下，以免产生测量误差。5.须按照仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性。6.对于单向流，仪器采样口的朝向应正对气流方向，对于非单向流，采样口宜向上。7.布置采样点时，应避开回风口。8.采样时，测试人员应在采样口下风侧。

  2．采样点多于5点时，也可以在离地面0.8m～１.5m高度的区域内分层布置，但每层不少于5点。

  1．对任何洁净室（区），采样点的数目≥2个，总采样次数≥5次。每个采样点的采样次数可以＞1次，且不同采样点的采样次数可以不同。

  以检测区域的某个采样点的最大平均粒子浓度和全部采样点粒子浓度平均值的95%置信上限进行报告。

  洁净室（区）微生物可检测沉降菌或浮游菌。沉降菌检测是通过自然沉降原理，收集空气中的生物粒子于培养基平皿中，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。浮游菌的检测是采用计数浓度法，即通过收集悬浮在空气中生物粒子于专门的培养基，经若干时间，在适宜的生长条件下其繁殖到可见的菌落进行计数，从而判定洁净环境内单位体积空气中的活微生物数，以此来评定洁净室（区）的洁净度。

  实际检测浮游菌和沉降菌时，先确认洁净室（区）的检验测试条件能否达到级别要求。达到一定的要求后，测试人员和检验测试仪器等按洁净室（区）的进出规定（如穿戴符合环境级别的工作服、紫外照射、仪器外体消毒等）进出洁净室（区），测试人员先测量测试区域的面积和体积，确定采样次数和采样点。浮游菌确定采样量后按仪器操作规程操作，把空气中悬浮的微生物采集到肉汤琼脂培养基上。沉降菌确定采样时间后直接把培养基在空气中，让空气中的微生物自动降落在肉汤琼脂培养基上。采样要点见表4～7。采集完的培养基需在30℃～35℃培养箱中培养，时间≥48h。同时选定不少于3只培养基作空白对照培养。

  1.检测前应仔细检查每个培养皿的质量，不可以使用有变质、破损或污染的培养基和培养皿。

  4.由于细菌种类非常之多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔仔细细地观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

  5.若在本实验室以外的环境中进行仔细的检测，则培养基在整个运送过程中必须对温度来控制，培养基需放在含有冰块的、消毒过的运输箱内，温度控制在0℃～4℃，并在记录中记录运输温度。

  3．对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行≥10min后开始。

  4．对非单向流，如10 000级，100 000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行≥30 min后开始。

  浮游菌测试的最少采样点数目分为日常监测及环境验证两种情况，见表5。每个采样点一般采样一次。

  1）对每个100级洁净操作区域（如层流罩、层流工作台），可在离药物敞开口处30cm处设测点，每班一次。

  2）对每个10 000级洁净工作区域（如药物开口工作区），可在工作面处设测点，每班一次。

  注：1）表1中的面积，对于100级的单向流洁净室（包括层流工作台），指的是送风口表面积，对于10 000级，100 000级，300 000级的非单向流洁净室，指的是房间面积。

  注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面面积；对非单向流洁净室，是指的房间面积。

  风速和换气次数检测依据为JGJ71-90。风速、换气次数必须首先进行仔细的检测，洁净室的各项效果必须是在设计的风速风量条件下获得的。以风口截面平均风速乘以风口净截面面积确定风量。洁净室（区）换气次数以送风量除以洁净室（区）的体积来确定，从而判定洁净室（区）是不是满足级别规定，百级洁净室（区）只需以最低风速进行判定。检测要点见表10。检测时，需注意检测风速宜用检测架固定风速仪以避免人体干扰，不得不手持风速仪检测时，手臂应伸直至最长位置，使人体远离测头。

  风机运行正常，系统中各部件安装正确，无障碍（如过滤器无被堵、挡），所有阀门固定在一定的开启位置上，并且必须实际测量被测风口、风管尺寸以及被测洁净室（区）的体积。

  1．单向流洁净室：检测截面上测点间距不应大于２ｍ。其中垂直单向流：检测截面取距地面０.８ｍ的水平截面；水平单向流（层流）洁净室：取距送风面０.５ｍ的垂直截面。

  2．乱流洁净室：根据风口形式可选用辅助风管，即用硬质板材做成与风口内截面相同、长度等于２倍风口边长的直管段，连接于过滤器风口外部，在辅助风管出口平面上取采样点。

  百级洁净室（区）检测结果报告以检测区域风速的最低数值进行报告。百级以上的洁净室（区）检测结果报告以检测区域的总风量数值或换气次数的实际值进行报告。

  这些参数指标主要以JGJ71-90为检测依据，以各检测仪的原理进行仔细的检测。检测要点见表11～14。

  检测需注意:1.噪声检测时，检测工作员不得发出任何有碍于结果测定的声音（如摩擦声，说线.照度检测时，仪器的采样探头不能有杂物污染，采样时应在明亮处，不能在物体的阴影处采样，且洁净室（区）照度只测定除特殊局部照明之外的一般照明。

  风速或换气次数达到级别要求，穿戴符合环境级别的工作服，在所有门关闭时进行。

  风速或换气次数达到级别要求，穿戴符合环境级别的工作服。新安装的日光灯必须已有１００ｈ的使用期，旧日光灯必须已点燃１５ｍｉｎ。

  测点平面离地面０.８ｍ，按１ｍ～２ｍ间距布置，测点距离墙面１ｍ（小面积房间为０.５ｍ）。

  2.恒温工作区内有代表性的地点（如沿着工艺设备周围布置或等距离布置）；

  采样点次数见表15。对有恒温要求的场所，根据对温度和相对湿度波动范围的要求，检测宜连续进行８h～４８ｈ，每次测定间隔不大于３０ｍｉｎ。

  这些参数指标主要以JGJ71—90为检测依据，以各检测仪的原理进行仔细的检测。检测要点见表11~14。

  检测需注意：1.噪声检测时，检验人员不得发出任何又碍于结果测定的声音（如摩擦声，说线.照度检测时，仪器的采样探头不能有杂物污染，采样时应在照明亮处，不能在物体的阴影处采样，且洁净室（区）照度只测定除特殊局部照明之外的一般照明。

  A、微生物洁净室设计说明技术指标说明：微生物洁净室设计说明实验区空气调节系统由制冷量＊＊KW的组合式空调机组。微生物洁净室设计说明洁净度（万级）≥0.5um≤350000粒/m3微生物洁净室设计说明微生物浮游菌万级≤100/m3微生物洁净室设计说明沉降菌万级≤3个/皿微生物洁净室设计说明照明：实验台300LX，其它生产区域为150LX。微生物洁净室设计说明室内相邻房间相对静压差≥5pa，相对室外静压≥10pa。微生物洁净室设计说明室内温度18-26°C，室内相对湿度为45-60%。微生物洁净室设计说明室内噪音≤60db(A)。微生物洁净室设计说明电源：AC220V/380V-50HZ

  B、微生物洁净室设计说明排风口装有高效过滤器，送风口装有高效过滤静压箱，以实现进气洁净，另外更换高效过滤器比较方便。

  C、一般室内送排风采用上送下排方式，室内排风口应设在室内被污染风险最高的区域，单侧布置，不得有障碍。

  实验室设计基本思路为经济、实用。净化要求级别为万级。实验室设计有一更、二更、风淋和缓冲等实验前的准备工作。采用人流、物流分开原则，以减少实验污染，保证安全。

  A、本布置紧凑、合理，满足了实验室操作和空气洁净度等级要求，同时力求科学性与经济性的原则，考虑实验室要求和发展及运行的成本最优。

  B、洁净室入口处设置风淋室，能有效清除人体所带灰尘，减少洁净室的灰尘量，同时风淋室也起到了气闸的作用，防止不洁净空气由门进入洁净区。

  C、洁净室需向室内供给特殊的比例的新鲜空气，净化过滤后进入各实验室以补偿排风，保证正压及工作人员需要。

  D、风量回风次数采用风量调节阀对不一样的要求洁净级别的区域来控制，以及压强梯度的调节，保证气流同“清洁”区域流向“污染”区域，洁净室不同级别之间压差为≥5pa，洁净室与室外压差为≥10pa。

  G、观察窗为密闭洁净窗，门为气密洁净门。生物洁净室设计和施工中的问题摘要：本文介绍了几种不一样生物洁净室的不同特点和设计方法，并针对在生物洁净室设计施工中出现的几个问题提出自己的看法和意见。

  生物洁净室的应用愈来愈普遍，目前集中在医院手术室和病房、制药厂、生物安全实验室、动物房等。同样级别的洁净室，由于应用领域不相同，要求也有很大区别，笔者检测的若干生物洁净室中，出现了各种不同问题，很多是由于对各种生物洁净室的特点和要求缺乏了解造成的。首先，不一样的生物洁净室一定要遵循相应的规范要求，不了解这些规范，是没有办法进行设计施工的。目前针对不一样生物洁净室的一些规范如表1所列。只有熟悉各行业的特点，充分掌握各规范的要求，才能切实做好生物洁净室的设计、施工、调试等工作。

  首先是平面布置方面的问题。这样的一个问题在药厂洁净厂房和生物安全实验室的平面设计中尤为突出，主要的问题是平面过于复杂。的确，在药厂平面设计中，应尽量保证洁净区不受污染，做到合理分区，洁污分开，人流、物流明显，但一定要避免矫枉过正。由于一些行业主管部门在制订验收标准时，缺乏专业相关知识，对洁净室的原理和特点了解不够，往往将洁净室过于神秘化，复杂化，因此对洁净室平面布局过于苛刻，造成很多不必要的麻烦。这样的一个问题在缓冲室的设置上尤为突出。例如某药厂人员进入洁净厂房的过程是这样的：换鞋一更缓冲二更洗手消毒缓冲洁净走廊三更缓冲或手消毒高级别洁净室，由此，工作人员在进入高级别洁净室工作前，需要进出9个房间，开启关闭18扇门，其复杂程度可想而知。

  另外，很多药厂由于规模小投资少，厂房十分紧凑，以至于每间辅助间的面积只有几平方米，甚至只有2平方米，于是工作人员在几乎不能同时容下2人的房间里，不停的开门、转身、关门，以至于近乎晕头转向。要求严格是好事，但如果矫枉过正就会适得其反，很多工人为了进出方便，往往很多门都不关，很多房间形同虚设。将可以合并的房间合并，将没有必要设置的房间取消，是解决这一问题的办法。例如洗手消毒可完全当作缓冲间，另外对于低级别洁净室之间，如万级和10万级洁净室之间，不一定非要设置缓冲室，有些场合，三更的设置也能考虑的。缓冲间的设置主要是通过进出两门的不同时开启起到气闸的隔离作用，如果严格管理，一些辅助房间如二更等，可完全起到缓冲作用。

  另外，在10万级和万级房间也没有一定设置缓冲的必要。10万级房间和万级房间内的空气含尘浓度不象一些非专业人士想象的那样相差10倍，门一开启就会污染。事实上，两者相差不多，例如兽药GMP(2002)中规定，10万级房间最低换气次数是15次/h，万级房间最低换气次数是20次/h，相差不多，另外由于房间体积普遍较小，例如对于4m2的房间，5次/h的换气次数仅有50m3/h左右的送风量，而这50m3/h的送风量是较难调整的，另外，无论设计施工都要适当留有一定余量，所以，从笔者检测的若干药厂来看，在人员进出路线上的一些小房间，除了名义上的洁净度级别不同外，其换气次数和空气含尘浓度没什么区别。有时所谓的10万级房间的含尘浓度比万级房间还要低。以上的观点是想证明不能以主观意识制订验收标准，应该充分以实际出发考虑问题。精简平面并不影响实际功能，还能够使人员进出方便简单，节省工程建设价格，扩大有效使用面积，何乐而不为。同样的问题还出现在三级生物安全实验室的建设中，行业主管部门除了要求加设很多缓冲外，还要求做到人流、物流、洁物、污物各走不同路线，完全分开，但事实上是不可能做到的，也没有必要。

  一些政策制订人为强调重视程度或迎合一些需要，提出的“生物安全怎么强调都不过份”的说法是不负责任的，对于工程技术人员来讲必须一切从实际出发，凡事都要有度。只要能完全满足安全需要即可，层层加码是专业相关知识不足，缺乏自信心的表现。作者觉得，自SARS以来提出的P3实验室设“三区两缓”（即实验室分为清洁区，半污染区和污染区，不一样的区域之间必须设缓冲）的要求有待商榷，从国外的一些资料也能够正常的看到，一些发达国家的生物安全实验室平面比我们简单的多，一些危险度不高的实验室设置“两区一缓”就足够了。制订“三区两缓”的人可能设计工作接触不多，事实上，由于生物安全实验室对压差要求极为严格，“三区两缓”往往要6、7层房间，层层负压，而且要严格保证，无论从设计、施工以及自控上，都是极难保证的。所以还是要从实际出发，让生物安全实验室实际做到安全、实用、经济、可行。

  在生物洁净室施工中有一个突出的问题是圆弧角的使用。生物洁净室主要以控制细菌等微生物为根本目的，而微生物极易在一些角落里滋生，因此生物洁净室应易于清扫，最好能够降低死角，因此在JGJ 71-90《洁净室施工及检验收取规范中》的第2.3.8条规定：踢脚板部分施工时应与墙面齐平或略缩进2~3mm。当踢脚板与地面材料相同时可做成小圆角，其圆角半径R应不小于50mm；当踢脚板与地面材料不同时，应用弹性材料嵌固。除地面与墙面的交角要求可设圆角外，对别的部位并未做规定。现在普遍的做法是将所有交角均加装铝合金圆角，由于制作粗糙，使得很多工程的圆角流于形式，甚至作用适得其反。对于墙壁之间，墙壁与顶棚之间的圆角，本来作用不是很大，现在成了实施工程单位掩盖粗糙接角的“遮羞布”。

  对于墙面与地面的交角，其实是十分关键的，但往往成为藏污纳垢，滋生细菌的场所。原因主要在于：由于圆弧角有厚度，在圆角与板壁和地面的两个交角处，便会形成两个细小的接缝，由于地面、板壁不平，在接缝处往往有很多缝隙，很多实施工程单位偷工减料，没有打胶密封，有的即使打胶了，也会有开裂的现象。因此本来的目的是为了消除卫生死角，而真实的情况却增加了很多隐患。这样的一种情况在平时不明显，在洁净室进行卫生清扫时就会暴露无遗，地面上一旦有水，水会通过缝隙渗到隔壁房间，圆角下经常满是水渍，成为细菌滋生的绝好场地。造成这种情况的最终的原因是对规范的规定没有真正领会，只是流于形式。对于我国的生物洁净室建设，我们已不能仅仅满足于那种解决“有与没有”的层面，必须提高层次，做到真正实用，而不是应付认证工作，不仅要建，而且一定要建好。

  2.安装圆角之后，铺装整体卷材地面，然后将卷材沿圆角上铺至壁板，使圆角和地面成为一体。

  3.采用建筑材料（如胶砂）砌筑圆弧状的壁板基座，基座与地面做同样的处理，如刷涂料等，使地面和基座成为一体，而且基座作为踢脚部分与墙面齐平或低于墙面。生物洁净室的特点还很多，实际工程中的问题也很多，我们只有充分了解不同类别洁净室的不一样的要求和特点，熟悉规范的规定，才能真正把生物洁净室建设好。

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